凝血酶ph
2016-01-13 01:38
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我用了amersham的凝血酶，protocal上說16到25度20hr后，每mg融合蛋白用10U的凝血酶切割可以得到90%的切割效率，可是我用pH7.5的PBS溶解融合蛋白后，每mg蛋白加入凝血酶6U、12U、24U，分別在室溫和37度溫育，8小時、16小時、24小時分別取樣，發現只有37度下24小時24U的凝血酶切了不到10%，而且出現了微弱的降解條帶，其他情況下融合蛋白都沒有什么變化，不知要怎樣優化酶切條件呢？
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回答2
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軒存旺 醫師
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全科
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應該用凝血酶酶切緩沖液溶解融合蛋白，凝血酶最適pH值為8.4左右;凝血酶量加少了,將凝血酶加倍試試
2016-01-13 10:20
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回答1
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肖起濤 主治醫師
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內科
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一般不會出現這種問題，做這個酶，1×pbs（ph＝7。3），也是用每毫克加了10U，20度20小時，酶切達80－90％，條件基本相同。而且這個酶也很貴呀，500U要500元。所以考慮1。你的酶有沒有問題，時間？是不是每次都拿出來化的，我是將它一起融解分裝后凍存，每次用的時候取一支。
2016-01-13 02:57
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