抗原和抗體加到瓊脂板上相對應的孔中，兩者各自向四周擴散，如兩者相對應，濃度比例合適，則經一定時間后，在抗原、抗體孔之間出現清晰致密的白色沉淀線。每一抗原與其相對應抗體只能形成一條沉淀線，若同時含有若干對抗原抗體系統，因其擴散速度的不同，可在瓊脂中出現多條沉淀線。且根據沉淀線融合情況，還可鑒定兩種抗原是完全相同還是部分相同。所以，可用此法來分析和鑒定標本中多種抗原或抗體成份，并用以測定抗原或抗體的效價。

1、用生理鹽水配制1.0～1.5%瓊脂，隔水煮沸使溶化，用吸管吸取4ml趁熱澆于載玻片上，制成瓊脂板。2、待瓊脂凝固后，用打孔器打3個距離相近的孔，并用針頭挑去孔中瓊脂（孔距為5mm）。3、在①孔中加正常人混合血清，在②孔中加小牛血清，③孔中加羊抗人全血清，注意不要溢出。4、將加好樣品的瓊脂板置于濕盒內，于37℃溫箱內放置24小時后觀察結果。觀察孔間沉淀線的數目與特征，一般可注意到以下幾種現象：1、抗原與抗體孔間形成一條沉淀線，說明只有一種抗原與相對應的抗體特異性結合，如出現數條沉淀線，說明有幾組不同的抗原和相對應抗體相結合2、根據抗原的成份可有以下三種現象：1）若二孔中的抗原相同，與相應抗體形成的沉淀線融合成弧形；（2）若二孔中抗原不同，當抗血清中分別含有與抗原相應的抗體時，則形成的沉淀線相交叉；（3）若兩孔中抗原部分相同，抗血清中有各相應的抗體，形成的沉淀線相切。3、相應抗原抗體所形成的沉淀線，如二者濃度相當，沉淀線在孔中央，二者濃度不當時，則沉淀線偏向濃度低的一側